MART/Melan-A黑色素瘤標(biāo)記物ELISA試劑盒
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本試劑盒用于測定人血清、血漿、組織勻漿及相關(guān)液體樣本中MART/Melan-A黑色素瘤標(biāo)記物的含量。
實驗原理:
上海試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯(lián)吸附試驗(ELISA)。往預(yù)先包被MART/Melan-A黑色素瘤標(biāo)記物的包被微孔中,依次加入標(biāo)本、標(biāo)準(zhǔn)品、HRP標(biāo)記的檢測抗體,經(jīng)過溫育并洗滌。用底物TMB顯色,TMB在過氧化物酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中MART/Melan-A黑色素瘤標(biāo)記物呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm 波長下測定吸光度(OD 值),計算樣品濃度
試劑盒組成:
操作步驟:
Melan-A 試劑盒方法一 用于檢測未知抗原的雙抗體夾心法:
1. 包被:用0.05M PH9.牰碳酸鹽包被緩沖液將抗體稀釋至蛋白質(zhì)含量為1~10μg/ml。在每個聚板的反應(yīng)孔中加0.1ml,4℃過夜。次日,棄去孔內(nèi)溶液,用洗滌緩沖液洗3次,每次3分鐘。(簡稱洗滌,下同)。
2. 加樣:加一定稀釋的待檢樣品0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時。然后洗滌。(同時做空白孔,陰性對照孔及陽性對照孔)。
3. 加酶標(biāo)抗體:于各反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)抗體(經(jīng)滴定后的稀釋度)0.1ml。37℃孵育0.5~1小時,洗滌。
4. 加底物液顯色:于各反應(yīng)孔中加入臨時配制的TMB底物溶液0.1ml,37℃10~30分鐘。
5. 終止反應(yīng):于各反應(yīng)孔中加入2M0.05ml。
6. 結(jié)果判定:可于白色背景上,直接用肉眼觀察結(jié)果:反應(yīng)孔內(nèi)顏色越深,陽性程度越強,陰性反應(yīng)為無色或極淺,依據(jù)所呈顏色的深淺,以“+”、“-”號表示。也可測O·D值:在ELISA檢測儀上,于450nm(若以ABTS顯色,則410nm)處,以空白對照孔調(diào)零后測各孔O·D值,若大于規(guī)定的陰性對照OD值的2.1倍,即為陽性。
黑色素瘤標(biāo)記物ELISA方法二 用于檢測未知抗體的間接法:
用包被緩沖液將已知抗原稀釋至1~10μg/ml,每孔加0.1ml,4℃過夜。次日洗滌3次。加一定稀釋的待檢樣品(未知抗體)0.1ml于上述已包被之反應(yīng)孔中,置37℃孵育1小時,洗滌。(同時做空白、陰性及陽性孔對照)于反應(yīng)孔中,加入新鮮稀釋的酶標(biāo)第二抗體(抗抗體)0.1ml,37℃孵育30-60分鐘,洗滌,后一遍用DDW洗滌。其余步驟同“雙抗體夾心法”的4、5、6。
注意事項:
1. 正式試驗時,應(yīng)分別以陽性對照與陰性對照控制試驗條件,待檢樣品應(yīng)作一式二份,以實驗結(jié)果的準(zhǔn)確性。有時本底較高,說明有非特異性反應(yīng),可采用羊血清、兔血清或BSA等封閉。
2. 在酶聯(lián)ELISA試劑盒中,進(jìn)行各項實驗條件的選擇是很重要的,其中包括:
(1) 固相載體的選擇:許多物質(zhì)可作為固相載體,如聚、聚、聚丙酰胺和纖維素等。其形式可以是凹孔平板、試管、珠粒等。目前常用的是40孔聚凹孔板。不管何種載體,在使用前均可進(jìn)行篩選:用等量抗原包被,在同一實驗條件下進(jìn)行反應(yīng),觀察其顯色反應(yīng)是否均一性,據(jù)此判明其吸附性能是否良好。
?。?) 包被抗體(或抗原)的選擇:將抗體(或抗原)吸附在固相載體表面時,要求純度要好,吸附時一般要求PH在9.0~9.6之間。吸附溫度,時間及其蛋白量也有一定影響,一般多采用4℃18~24小時。蛋白質(zhì)包被的適濃度需進(jìn)行滴定:即用不同的蛋白質(zhì)濃度(0.1、1.0和10μg/ml等)進(jìn)行包被后,在其它試驗條件相同時,觀察陽性標(biāo)本的OD值。選擇OD值大而蛋白量少的濃度。對于多數(shù)蛋白質(zhì)來說通常為1~10μg/ml。
(3) 酶標(biāo)記抗體工作濃度的選擇:用直接ELISA檢測試劑盒法進(jìn)行初步效價的滴定(見酶標(biāo)記抗體部份)。然后再固定其它條件或采取“方陣法”(包被物、待檢樣品的參考品及酶標(biāo)記抗體分別為不同的稀釋度)在正式實驗系統(tǒng)里準(zhǔn)確地滴定其工作濃度。
(4) 酶的底物及供氫體的選擇:對供氫體的選擇要求是、安全、有明顯地顯色反應(yīng),而本身無色。有些供氫體(如OPD等)有潛在的致癌作用,應(yīng)注意防護(hù)。有條件者應(yīng)使用不致癌、靈敏度高的供氫體,如TMB和ABTS是目前較為滿意的供氫體。底物作用一段時間后,應(yīng)加入強酸或強堿以終止反應(yīng)。通常底物作用時間,以10-30分鐘為宜。底物使用液新鮮配制,尤其是H2O2在臨用前加入。
公司正在出售的產(chǎn)品:
GNG13 Protein Human 重組人 GNG13 蛋白 (His 標(biāo)簽)
白介素14抗體
人胱抑素F(CST7)試劑盒 Human Cystatin-F,CST7 ELISA kit
ARIP2B(Activin receptor 2B 0.5mgARIP2B(Activin receptor 2B) 激活素受體2B/激活素受體相互作用蛋白2b抗體
CHIT1 Protein Human 重組人 Chitotriosidase / Chitinase 1 / CHIT1 蛋白 (His 標(biāo)簽)
激肽釋放酶8(KLK8)重組蛋白 Recombinant Kallikrein 8 (KLK8)
EIF3K Protein Human 重組人 EIF3K 蛋白 (His & GST 標(biāo)簽)
人可溶性血栓調(diào)節(jié)蛋白(sTM)ELISA試劑盒 96T/48T
樣因子3(INSL3)ELISA試劑盒 ,英文名: INSL3 ELISA Kit
MouseKidneyinjurymolecule1,Kim-1ELISA試劑盒小鼠腎損傷分子1(Kim-1)ELISA試劑盒規(guī)格:96T/48T
細(xì)胞角蛋白7抗體
MRP1(Multidrug Resistanec-Associated Protein 1 0.5mgMRP1(Multidrug Resistanec-Associated Protein 1) 多藥耐藥相關(guān)蛋白1(抗原)
C7 Protein Human 重組人 C7 / Complement component 7 蛋白 (Fc 標(biāo)簽)
BRPF3蛋白抗體
泛素硫酯酶L1+3抗體
Beta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽 0.1mgBeta-Amyloid 1-42 CT β淀粉樣肽 1-42 (C端多肽)
英文名稱HumanangiotensinogenELISAKit人血管緊張素原(aGT)規(guī)格:96T/48T
豬白介素1β (IL-1β)試劑盒 Porcine Ierleukin 1β,IL-1β ELISA Kit
細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體 Anti-SEPT10 WB IHC-P IHC-F IF 100ul
迷走神經(jīng) 詢價
p21激活激酶1抗體
人肌球蛋白輕鏈激酶(MLCK)試劑盒 Human myosin light chain kinase,MLCK ELISA Kit
人葡萄糖依賴性釋放多肽(GIP)ELISA 試劑盒 96T/48T
MART/Melan-A黑色素瘤標(biāo)記物ELISA試劑盒脂肪酸延長酶抗體
甲基檸檬酸合酶(MCS)試劑盒可見分光光度法
780元
產(chǎn)品名:甲基檸檬酸合酶,可見分光光度法,試劑盒
脂肪酸合成酶(FAS)試劑盒紫外分光光度法
780元
產(chǎn)品名:脂肪酸合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
乙酰輔酶A試劑盒紫外分光光度法
780元
產(chǎn)品名:乙酰輔酶A試劑盒,紫外分光光度法,試劑盒
線粒體檸檬酸(MCA)含量試劑盒紫外分光光度法
975元
產(chǎn)品名:線粒體檸檬酸,紫外分光光度法,試劑盒
?;D(zhuǎn)移酶(AAT)試劑盒可見分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:酰基轉(zhuǎn)移酶,可見分光光度法,試劑盒
可溶性淀粉合成酶(SSS)試劑盒紫外分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:可溶性淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
結(jié)合態(tài)淀粉合成酶(GBSS)試劑盒紫外分光光度法
1300元
產(chǎn)品名:結(jié)合態(tài)淀粉合成酶,紫外分光光度法,試劑盒
NO含量試劑盒可見分光光度法
200元
產(chǎn)品名:NO含量,可見分光光度法,試劑盒