項(xiàng)目簡(jiǎn)介
外泌體為大小30 ～100 nm 的細(xì)胞外泌性囊泡，具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu)。近年研究顯示，外泌體是細(xì)胞與細(xì)胞間通訊的重要的分子，參與諸多生理與病理過(guò)程。外泌體不僅包含蛋白質(zhì)成分，還包括一些RNA成分，如微小 RNA( microRNA，miRNA) 、長(zhǎng)鏈非編碼RNA和mRNA、環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）。外泌體所攜帶的這些 RNA統(tǒng)稱為外泌體來(lái)源 RNA，有望作為液體活檢分子標(biāo)志物，在醫(yī)學(xué)發(fā)展上有著光明的前景。
表觀生物采用Qiagen exoRNeasy Serum/Plasma Maxi Kit提取exosomal RNA，該試劑盒來(lái)源于美國(guó)Exosome Diagnostics, Inc.公司的技術(shù)，能夠在20分鐘內(nèi)快速純化得到細(xì)胞外囊泡，并獲得更為全面的RNA分子，適合用于檢測(cè)外泌體中的環(huán)狀RNA及其他長(zhǎng)片段的線性RNA。 我們結(jié)合新的高通量測(cè)序技術(shù)和生物信息分析方案，將為您提供為全面的外泌體longRNA測(cè)序服務(wù)！
項(xiàng)目流程

測(cè)序方案
1) 測(cè)序平臺(tái)：Illumina HiSeq X10/Hiseq 4000
2) 測(cè)序模式：PE150
3) 測(cè)序數(shù)據(jù)量： 6-8G
4) 適用物種：人
5) 樣本類型：人血清或血漿（推薦使用），每個(gè)樣本2ml-4ml體積
6） 樣本數(shù)建議：10 VS 10

分析內(nèi)容
1. 去接頭污染，去低質(zhì)量reads和測(cè)序質(zhì)量評(píng)估
2. 參考基因組比對(duì)
3. 全基因組reads分布圖譜
4. 環(huán)狀RNA預(yù)測(cè)
5. 環(huán)狀RNA表達(dá)差異分析
6. mRNA表達(dá)差異分析
7. 差異基因KEGG、GO分析
8. 差異lncRNA分析

參考案例
來(lái)自復(fù)旦大學(xué)的科研人員發(fā)現(xiàn)了exosomes內(nèi)含有大量circRNA。
研究者從MHCC-LM3肝癌細(xì)胞以及此細(xì)胞來(lái)源的exosomes中分別提取總RNA（去除核糖體RNA），進(jìn)行RNA-seq分析，發(fā)現(xiàn)exosomes中的circRNA比exosomes來(lái)源細(xì)胞中的circRNA豐富得多。
通過(guò)exosomal RNA測(cè)序方法，研究者發(fā)現(xiàn)人血清e(cuò)xosomes也含有大量完整穩(wěn)定的circRNA，并且結(jié)直腸癌病人血清e(cuò)xosomes中的circRNA與正常人差異明顯，腫瘤來(lái)源的exo-circRNA有望成為癌癥檢測(cè)的潛在生物標(biāo)志物。

(G) 血液中外泌體環(huán)狀RNA在全基因組的位置分布
(H) 血清外泌體環(huán)狀RNA的序列長(zhǎng)度分布



(M) 正常人血清和直腸癌病人血清外泌體環(huán)狀RNA的表達(dá)譜差異比較
(N) qRT-PCR 檢測(cè)環(huán)狀RNA分子circ-KLDHC10 的表達(dá)水平在正常血清和
直腸癌病人血清中有明顯差異。

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