僅供研究使用

 豚鼠葡萄糖依賴(lài)性釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒

90分鐘一步法ELISA試劑盒可以適用于、、組織勻漿、細(xì)胞上清液等樣本類(lèi)型。這些樣本可以用于檢測(cè)、和其他微生物等病原體，以及、自身性等病理情況。同時(shí)，ELISA試劑盒還可以用于檢測(cè)濃度、維生素等營(yíng)養(yǎng)，以及污染物等有害的殘留量。需要注意的是，不同樣本類(lèi)型和檢測(cè)項(xiàng)目可能對(duì)ELISA試劑盒的靈敏度和特產(chǎn)生影響，因此在選擇使用ELISA試劑盒時(shí)需要根據(jù)具體情況進(jìn)行選擇。

ELISA試劑盒基于抗原之間的特異結(jié)合反應(yīng)，以前用于測(cè)定的抗原通常為各種純化抗原，而則為純化抗原動(dòng)物后的多克隆和使用雜交瘤技術(shù)的單克隆，而抗原或的標(biāo)記物如酶標(biāo)結(jié)合物則通過(guò)各種化學(xué)合成制備。ELISA試劑盒的作用ELISA試劑盒是一種用于體外定性檢測(cè)人或中的特定的試劑盒，例如抗人類(lèi)戊型（HEV）IgMELISA檢劑盒。ELISA試劑盒具有靈敏度高、特好、操作簡(jiǎn)便、安全、快速等優(yōu)點(diǎn)，可以用于檢測(cè)類(lèi)因子、、等，在臨床診斷、科研和生物制品檢測(cè)等領(lǐng)域具有廣泛的應(yīng)用。

試劑盒操作步驟：

   實(shí)驗(yàn)開(kāi)始前，請(qǐng)?zhí)崆芭渲煤盟性噭?，試劑或樣品稀釋時(shí)，均需混勻，混勻時(shí)盡量避免起泡。每次檢測(cè)都應(yīng)該做曲線(xiàn)。如樣品濃度過(guò)高時(shí)，用樣品稀釋液進(jìn)行稀釋?zhuān)允箻悠贩显噭┖械臋z測(cè)范圍。

1.加樣：分別設(shè)空白孔、孔、待測(cè)樣品孔?？瞻卓准訕悠废♂屢?00μl，余孔分別加品或待測(cè)樣品100μl，注意不要有氣泡，加樣將樣品加于酶標(biāo)板孔底部，盡量不觸及孔壁，輕輕晃動(dòng)混勻，酶標(biāo)板加上蓋或覆膜，37℃反應(yīng)120分鐘。 為實(shí)驗(yàn)結(jié)果有效性，每次實(shí)驗(yàn)請(qǐng)使用新的品溶液。

2.棄去，甩干，不用洗滌。每孔加生物素標(biāo)記工作液 100μl（取1μl生物素標(biāo)記加99μl生物素標(biāo)記稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用小時(shí)內(nèi)配制），37℃,60分鐘。

3.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)，甩干，洗板3次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

4.每孔加辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素工作液（同生物素標(biāo)記工作液） 100μl，37℃，60分鐘。

5.溫育60分鐘后，棄去孔內(nèi)，甩干，洗板5次，每次浸泡1-2分鐘，350μl/每孔，甩干。

6.依序每孔加底物溶液90μl，37℃避光顯色（30分鐘內(nèi)，此時(shí)可見(jiàn)品的前3-4孔有明顯的梯度藍(lán)色，后3-4孔梯度不明顯，即可終止）。

7.依序每孔加終止溶液50μl，終止反應(yīng)（此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)）。終止液的加入順序應(yīng)盡量與底物液的加入順序相同。為了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性，底物反應(yīng)時(shí)間到后應(yīng)盡快加入終止液。

8.用酶聯(lián)儀在450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的光密度（OD值）。在加終止液后15分鐘以?xún)?nèi)進(jìn)行檢測(cè)。

豚鼠葡萄糖依賴(lài)性釋放多肽(GIP)ELISA試劑盒

ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理.ELISA試劑盒的實(shí)驗(yàn)原理是建立在抗原與學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上的，同時(shí)結(jié)合了酶的催化作用。其基本原理包括三個(gè)方面：1.抗原或能以物理性地吸附于固相載體表面，可能是蛋白和聚表面間的疏水性部分相互吸附，并保持其學(xué)活性。2.抗原或可通過(guò)共價(jià)鍵與酶連接形成酶結(jié)合物，而此種酶結(jié)合物仍能保持其學(xué)和酶學(xué)活性。3.酶結(jié)合物與相應(yīng)抗原或結(jié)合后，可根據(jù)加入底物的顏色反應(yīng)來(lái)判定是否有反應(yīng)的存在，而且顏色反應(yīng)的深淺是與標(biāo)本中相應(yīng)抗原或的量成正比例的，因此，可以按底物顯色的程度顯示試驗(yàn)結(jié)果。ELISA法一方面是建立在抗原與學(xué)反應(yīng)的基礎(chǔ)上，因而具有特。而另一方面又由于酶標(biāo)記抗原或是酶分子與抗原或分子的結(jié)合物，它可以催化底物分子發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生放大作用，正因?yàn)榇朔N放大作用而使本法具有很高的性。因此，ELISA法是一種既又特異的。

標(biāo)本的采集及保存：

• 
  

  
  ：全血標(biāo)本請(qǐng)于室溫放置2小時(shí)或4℃過(guò)一晚后于1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  

  
  


• 
  

  
  ：可用EDTA或肝素作為抗凝劑，標(biāo)本采集后30分鐘內(nèi)于2 - 8° C 1000 x g離心15分鐘，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。
  

  
  


• 
  

  
  細(xì)胞物上清或其它生物標(biāo)本：1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測(cè)，或?qū)?biāo)本放于-20℃或-80℃保存，但應(yīng)避免反復(fù)凍融。 (注：標(biāo)本溶血會(huì)影響**檢測(cè)結(jié)果，因此溶血標(biāo)本不宜進(jìn)行此項(xiàng)檢測(cè)。)
  

  
  


• 
  

  
  標(biāo)本的稀釋原則：通過(guò)文獻(xiàn)檢索的了解待測(cè)樣本的大致含量，確定適當(dāng)?shù)南♂尡稊?shù)。只有稀釋至曲線(xiàn)的范圍內(nèi)，檢測(cè)的結(jié)果才是準(zhǔn)確的。稀釋的中，應(yīng)做好詳細(xì)的記錄。計(jì)算濃度時(shí)，稀釋了“N”倍，標(biāo)本的濃度應(yīng)再乘以“N”。
  

  
  


• 
  

  
  品的稀釋原則：2瓶，每瓶臨用前以樣品稀釋液稀釋至1ml，蓋好后靜置10分鐘以上，然后反復(fù)顛倒/搓動(dòng)以助溶解，其濃度為300 pg/ml，做系列倍比稀釋后，分別稀釋300 pg/ml，150 pg/ml，75 pg/ml，37.5 pg/ml，18.5 pg/ml，9 pg/ml，4.5 pg/ml，樣品稀釋液直接作為濃度0 pg/ml，臨用前15分鐘內(nèi)配制。 如配制150 pg/ml品：取0.5ml（不要少于0.5ml）300 pg/ml的上述品加入含0.5ml樣品稀釋液的Eppendorf管中，混勻即可，其余濃度以此類(lèi)推。
  

  
  


• 
  

  
  生物素標(biāo)記的稀釋原則：臨用前以生物素標(biāo)記稀釋液稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl生物素標(biāo)記加990μl生物素標(biāo)記稀釋液的比例配制，輕輕混勻，在使用小時(shí)內(nèi)配制。
  

  
  


• 
  

  
  辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素的稀釋原則：臨用前以辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液稀釋?zhuān)♂屒案鶕?jù)預(yù)先計(jì)算好的每次實(shí)驗(yàn)所需的總量配制（每孔100μl），實(shí)際配制時(shí)應(yīng)多配制0.1-0.2ml。如10μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素加990μl辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記親和素稀釋液 的比例配制，輕輕混勻，在使用小時(shí)內(nèi)配制
  

  
  

注意事項(xiàng)：

1.當(dāng)混合蛋白溶液時(shí)應(yīng)盡量輕緩，避免起泡。

2.洗滌非常重要，不充分的洗滌易造成假陽(yáng)性。

3.一次加樣時(shí)間**控制在5分鐘內(nèi)，如標(biāo)本數(shù)量多，建議使用排槍加樣。

4.請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做曲線(xiàn)，做復(fù)孔。

5.如標(biāo)本中待測(cè)含量過(guò)高，請(qǐng)先稀釋后再測(cè)定，計(jì)算時(shí)請(qǐng)乘以稀釋倍數(shù)。

6.在配制品、檢測(cè)溶液工作液時(shí)，請(qǐng)以相應(yīng)的稀釋液配制，不能混淆。

7.底物請(qǐng)避光保存。

8.不要用其它生產(chǎn)廠家的試劑替換試劑盒中的試劑。

試劑盒性能

1．準(zhǔn)確性：品線(xiàn)性回歸與預(yù)期濃度相關(guān)系數(shù)R值，大于等于0.9900。

2．靈敏度檢測(cè)濃度小于10 pg/ml。

3．特：不與其它可溶性結(jié)構(gòu)類(lèi)似物交叉反應(yīng)。

4．重復(fù)性：批內(nèi)與批見(jiàn)應(yīng)分別小于9%和15%。